今年デビュー5周年を迎え、USJと同じくメモリアルイヤーとなる“なにわ男子”の4人による「チームなにわ男子」は、原田泰造(ネプチューン)と堀内健(ネプチューン)、対するのは名倉潤(ネプチューン)と林修、現在公開中の映画『ザ・スーパーマリオギャラクシー・ムービー』で声優を務めるマリオ役の宮野真守、キノピオ役の関智一、そして映画アンバサダーのチョコレートプラネット(長田庄平、松尾駿)による「チームマリオ」。なお、宮野と関は今回が番組初登場となる。
地元のプライドをかけて全問正解を狙う「チームなにわ男子」と、作品の看板を背負う「チームマリオ」。25周年の祝祭ムード漂うパークを舞台に、一歩も譲れない真剣勝負が幕を開ける。
今回両チームが挑むのは、1stステージ「ブレインタワーゴールド」、2ndステージ「ファイブリーグ」、3rdステージ「セブンコード」、4thステージ「ハイパーボンバー」の全4ステージ。問題は、USJで体験できる映画やゲーム、アニメなど超人気作品の世界から幅広く出題され、初心者も、USJマニアも楽しめる、充実した内容となっている。「チームなにわ男子」の大西は、「(USJは)僕たちの地元(大阪)ですし、プライベートでもメンバー同士で行くので」と自信満々。
さらに藤原は「事務所に送った履歴書の写真は、USJのパーク内で撮った写真なんです。USJがなかったら、この場に立っていなかった」と、自身の原点ともいえる驚きの縁を明かし、スタジオを沸かせる。一方、「チームマリオ」のチョコプラ・松尾は「間違えるようなことがあれば、アンバサダーを降りますので…!」と退路を断つ強気な宣言で自らにプレッシャーをかけ、スタジオの笑いを誘う。また、問題VTRにはUSJでのライブ経験を持つ元日向坂46の丹生明里や、『M-1グランプリ2025』王者のたくろう(赤木裕、きむらバンド)も登場し、クイズバトルをさらに盛り上げる。
ボーナスステージ「トロッコアドベンチャー」では、USJオフィシャルホテル「ホテル ユニバーサル サポート」のペア宿泊券が抽選でプレゼントされる。

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